PCR是利用一段DNA為模板,在DNA聚合酶和核苷酸底物共同參與下,將該段DNA擴增至足夠數(shù)量,以便進(jìn)行結(jié)構(gòu)和功能分析。PCR醫(yī)學(xué)檢測方法在臨床上快速診斷細(xì)菌性傳染病等方面具有極為重要的意義。
PCR原理用于擴增位于兩段已知序列之間的DNA片段,類似于天然DNA的復(fù)制過程。以擬擴增的DNA分子為模板,以一對分別與模板5’末端和3’末端互補的寡核苷酸片段為引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留復(fù)制的機制沿著模板鏈延伸直至完成新的DNA合成,重復(fù)這一過程,即可使目的DNA片段得到擴增。
PCR醫(yī)學(xué)檢測先根據(jù)試劑盒說明書樣本要求,進(jìn)行標(biāo)本采集,常規(guī)的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支氣管灌洗液、肺泡灌洗液等。獲得患者樣本后需盡快進(jìn)行檢測,如無法立即檢測需要轉(zhuǎn)運的樣本,應(yīng)按照說明書的要求進(jìn)行低溫封存,并送到專門的檢測機構(gòu)進(jìn)行檢測。檢測機構(gòu)收到樣本后會對樣本進(jìn)行核酸提取。核酸提取試劑應(yīng)使用批準(zhǔn)的、產(chǎn)品說明書中的核酸提取試劑盒,病毒RNA先需要轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)錄為cDNA,再進(jìn)行擴張檢測。PCR檢測應(yīng)使用批準(zhǔn)產(chǎn)品說明書中的熒光定量PCR儀,通過熒光定量PCR所得到的樣本CT值的大小,可以判斷患者樣本中是否含有的病毒。